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更新時(shí)間：2024-11-04

探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
?PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。

 

適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

XAF1 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白（19-25）

Aquaporin 4 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白（59-68）

C2orf68 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白（107-114）

TRAAK antibody原裝、分裝型肝炎病毒4A區(qū)蛋白（21-34）（JT菌株）

Native Streptavidin protein (10nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒4A區(qū)蛋白（22-33）（FAD菌株）

Sumo 2 + Sumo 3 antibody [8A2] - ChIP Grade原裝、分裝型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)4A蛋白（22-34）（H菌株）

Native Streptavidin protein (15nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒核蛋白（88-96）

Native Streptavidin protein (20nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒-1 e2蛋白（484-499）

Recombinant Human PSMA7/HSPC protein原裝、分裝型肝炎病毒-1 e2蛋白（554-569）MMP26 antibody [EP1283Y]原裝、分裝生長(zhǎng)激素釋放子，大鼠

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝生長(zhǎng)激素釋放子（1-44），人

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝生長(zhǎng)激素釋放子-2

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝腸抑胃肽，，大鼠

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽，豬

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽（1-30）酰胺，豬

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽（3-42），人

CD34 antibody [EP373Y]原裝、分裝α-醇溶蛋白（43-49）

CD34 antibody [EP373Y]原裝、分裝胰高血糖素樣肽-1(1-37)，人，牛，大鼠，小鼠，荷蘭豬
探針法熒光定量PCR試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶14檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶1酶原檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶25檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶3/基質(zhì)裂解素1檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶4檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶5檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶7檢測(cè)試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶檢測(cè)試盒20mg